1、灭菌
培养基灭菌主要两种高压除菌及0.22um微孔滤膜滤除菌与滤相比高压灭菌工作强度本较低易造营养流失且加(菌谷氨酰胺溶液菌碳酸氢钠溶液等)程容易造二污染数培养基采用0.1~0.2μm孔径微孔滤膜进行滤灭菌并且已培养基除菌发展向低限度减少培养基营养损失
1.1 高压灭菌
某些培养基(MEM)进行高压灭菌例清MEM培养基MD605、MD609等类培养基般含L-谷氨酰胺碳酸氢钠般培养基高压灭菌加入L-谷氨酰胺碳酸氢钠菌液体另外高压谷氨酸盐(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺
高压灭菌培养基121℃、15psi15钟条件完全达灭菌效及营养损失需灭菌间延保证高压灭菌效灭菌设备验证关键
1.2 滤灭菌
供滤灭菌使用滤膜其材料polyethersulphone(PES)、尼龙、聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等般情况采取压滤压滤较负压滤具流速高、滤快、易污染避免蛋白质产量气泡等优点般使用滤器参照各供应商产品说明书
目前数实验室制采用微孔滤膜滤器(Zeiss滤器)或立式微孔滤器(Millipore、Pall)除菌微孔滤膜滤器锈钢间夹放0.22um滤膜使用种滤器重要步骤安装滤膜及菌滤程使用Zeiss滤器先要用培养用水滤膜充润湿安装滤膜其放置层定性滤纸再固定消毒旋钮要扭太紧凡与空气接触部位都要包(用牛皮纸、纱布、纺布等);高压灭菌菌环境立即旋钮扭紧滤除菌结束要打滤器检查滤膜否完整滤膜破裂需重新进行滤除菌程立式微孔滤器选用同微孔滤柱体积滤膜折叠膜面积显著增液体处理量且容易发堵塞现象